麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫捕獲法）說明書
【產(chǎn)品名稱】
中文名稱：麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫捕獲法）
【包裝規(guī)格】
48人份／盒、96人份／盒。
【預(yù)期用途】
定性檢測人血清或血漿樣本中的麻疹病毒IgM抗體。
用于麻疹病毒感染的輔助診斷。
麻疹是由麻疹病毒（measles virus，MV）引起的一種以發(fā)熱、呼吸道卡他癥狀和全身斑丘為特征的急性病毒性傳染病。在麻疹疫苗應(yīng)用之前，麻疹呈世界性分布，曾經(jīng)是嚴(yán)重危害兒童生命健康的傳染病之一。
自從1965年我國開始應(yīng)用麻疹疫苗，特別是1984年開展強(qiáng)化計(jì)劃免疫工作之后，我國麻疹發(fā)病率急劇下降，年發(fā)病率在10/10萬以下，但是近幾年隨著流動(dòng)人口逐漸增加，有些兒童得不到有效的預(yù)防接種，致使麻疹仍是兒童最常見的病毒感染性疾病。發(fā)病率每年在5～10萬[1]，估計(jì)實(shí)際發(fā)病率高于報(bào)告發(fā)病率，距離世界衛(wèi)生組織提出的控制乃至消除麻疹的目標(biāo)還有很大距離?，F(xiàn)有疫苗不能達(dá)到終生保護(hù)[2]，而且麻疹為呼吸道傳播，傳染性強(qiáng)。
目前，我國人口的流動(dòng)性大，當(dāng)易感人群累計(jì)到一定程度就可能引起麻疹的爆發(fā)和流行。并且，由于麻疹疫苗的廣泛使用，接觸野毒株的機(jī)會(huì)少，體內(nèi)抗體水平逐年減少，最終可能導(dǎo)致不能完全抵御麻疹病毒的侵襲，出現(xiàn)不典型的臨床表現(xiàn)[3]。其臨床癥狀很難與風(fēng)疹、人類細(xì)小DNA病毒B19、人單純皰疹6型、柯薩奇病毒、埃可病毒和登革熱感染相區(qū)別。癥狀典型的麻疹可根據(jù)臨床表現(xiàn)結(jié)合流行病學(xué)狀況做出診斷，而癥狀不典型的病人需根據(jù)血清麻疹抗體的檢測或麻疹病毒的分離陽性做出診斷。因此，提高和改進(jìn)麻疹病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)，從而，正確、快速診斷麻疹，及時(shí)掌握麻疹疫情顯得尤為重要。
【檢驗(yàn)原理】
酶聯(lián)免疫捕獲法原理：用抗人IgM-μ鏈單克隆抗體包被微孔板，加待檢血清或血漿到板孔中，樣品中所含的IgM抗體與微孔板上的抗人IgM-μ鏈抗體結(jié)合，形成抗體－二抗復(fù)合物。洗板后加入麻疹病毒抗原酶標(biāo)記物，形成（抗體－二抗－抗原酶標(biāo)記物）免疫復(fù)合物，洗板后加入顯色液，在酶作用下產(chǎn)生顏色反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀測定顯色反應(yīng)的強(qiáng)弱即可定性檢測待檢樣品中的麻疹病毒IgM抗體。
【主要組成成分】
1. 本試劑盒中包含的組分：
序號(hào) 組分名稱 主要成分 使用方法 裝量
    96人份/盒 48人份/盒
1 預(yù)包被抗人IgM-μ鏈抗體的微孔板 微孔板中預(yù)包被小鼠抗人IgM-μ鏈單克隆抗體。 直接使用，可拆成單孔使用 96孔 48孔
2 麻疹病毒抗原酶標(biāo)記物 辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的麻疹病毒抗原；硼酸鹽緩沖液，含防腐劑、蛋白穩(wěn)定劑。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 麻疹病毒IgM抗體陽性對照 麻疹病毒IgM抗體陽性人血清或血漿；硼酸鹽緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩(wěn)定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 麻疹病毒IgM抗體陰性對照 麻疹病毒IgM抗體陰性人血清或血漿；硼酸鹽緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩(wěn)定劑。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
5 顯色液A 檸檬酸、過氧化氫。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
6 顯色液B 檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 濃縮洗滌液（10倍） 磷酸鹽緩沖液，含0.5%吐溫-20，10倍濃縮。 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
8 樣品稀釋液（IgM） 硼酸鹽緩沖液，含甘油。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
9 終止液 0.5 mol/L 硫酸溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
10 密封袋   1個(gè) 1個(gè)
11 封板膜   4片 4片
12 記錄紙   1份 1份
注：酶標(biāo)記物、陽性對照、陰性對照，必須使用試劑盒配備的，不能使用其它批號(hào)產(chǎn)品。樣品稀釋液（IgM）可用于本公司IgM抗體檢測系列的ELISA試劑盒。顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液為通用試劑，可以用于本公司所有ELISA試劑盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸餾水或去離子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器與一次性吸嘴
37℃恒溫設(shè)備
微孔振蕩器
酶標(biāo)儀
60分鐘或更長時(shí)程的計(jì)時(shí)器
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
拆封后未用完的微孔板應(yīng)放入密封袋內(nèi)2℃～8℃保存。液體組分應(yīng)擰緊瓶蓋2～8℃保存。各組分拆封后應(yīng)在一個(gè)月內(nèi)用完。
生產(chǎn)日期及失效日期見標(biāo)簽。
【適用儀器】
具有450nm和630nm波長的酶標(biāo)儀
【樣本要求】
應(yīng)按照臨床采血技術(shù)規(guī)范操作采集血清或血漿樣品。室溫保存樣品不要超過8小時(shí)；若實(shí)驗(yàn)在8小時(shí)以后進(jìn)行，需將樣品保存在2℃～8℃；如保存超過1周則保存在-20℃以下，并避免反復(fù)凍融。本試驗(yàn)可用于含乙二胺四乙酸（EDTA）、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽抗凝劑樣本的檢測，但含其它種類抗凝劑的樣本能否用于本試驗(yàn)尚無實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。盡管膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯對本試劑盒檢測結(jié)果無顯著干擾，仍應(yīng)避免使用黃疸、溶血或高血脂樣品。明顯被污染的樣品不能用于檢測。
【檢驗(yàn)方法】
1. 試驗(yàn)過程注意事項(xiàng)  
1.1 試劑盒各組分從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)在室溫平衡至無潮氣方可使用。拆封后未用完的包被板應(yīng)放入密封袋內(nèi)保存。
1.2 在儲(chǔ)存及孵育過程中，應(yīng)避免強(qiáng)光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3 為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應(yīng)使用一次性吸嘴，不要重復(fù)使用。
1.4 在取用對照品和酶標(biāo)記物之前應(yīng)輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過的樣品。
1.5 嚴(yán)格遵守規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度。如果第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔太長，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育”時(shí)間，從而影響測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。
1.6 洗滌結(jié)束時(shí)，應(yīng)將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內(nèi)均無洗滌緩沖液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)注意正確操作。
2. 試驗(yàn)準(zhǔn)備
2.1 試劑盒反應(yīng)試劑準(zhǔn)備
2.1.1 微孔條
將檢測所需數(shù)量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2 洗滌液
在干凈的量筒內(nèi)稀釋濃縮洗滌液。50mL濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500mL，混勻。
2.1.3 其它液體組分
直接使用，使用前應(yīng)輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2 樣品準(zhǔn)備
樣品1:100稀釋：取10μL待檢樣品，加入至含有1mL樣品稀釋液（IgM）的小試管內(nèi)，充分混勻。
3. 檢測過程
3.1 每次實(shí)驗(yàn)每板須設(shè)空白孔、陽性對照各1孔，陰性對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜?biāo)記物，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；陽性對照、陰性對照直接使用，100μL/孔。其余每孔加入稀釋后樣品100μL。置37℃孵育60分鐘。
3.2 甩凈孔中液體，將洗液注滿每孔（約300μL/孔）后，甩凈拍干，反復(fù)3次。除空白孔外每孔加酶標(biāo)記物50μL，置37℃孵育60分鐘。
3.3 甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50μL，置37℃避光10～15分鐘，每孔加入終止液50μL，輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4 以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀讀取450nm處的A值；或以雙波長（A450nm－A630nm）計(jì)算A值。
4. 質(zhì)量控制
陰性對照值介于0.0～0.15，陽性對照值介于0.3～1.8，證明實(shí)驗(yàn)成立；否則試驗(yàn)結(jié)果無效，需重新試驗(yàn)。
【陽性判斷值】
如陰性對照A值平均值＜0.07，按0.07計(jì)算；如陰性對照A值平均值≥0.07，則按實(shí)際值計(jì)算。
計(jì)算S/N值，S/N值≥2.1，則判為陽性。S/N值＜2.1，判為陰性。
S/N值＝樣品A值÷陰性對照A值平均值
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 結(jié)果為陽性提示麻疹病毒急性或近期感染，對陽性和可疑結(jié)果建議1～2周后再次采樣檢測，動(dòng)態(tài)觀察抗體水平的變化。
2. 檢測結(jié)果僅供臨床參考，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合病史、癥狀及其它檢測結(jié)果做出診斷。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1. 樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。
2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品與交叉反應(yīng)項(xiàng)目中所列病原體的IgM抗體陽性血清及類風(fēng)濕因子無交叉反應(yīng)，但與其它交叉因子的交叉反應(yīng)尚無實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1. 靈敏度、特異性
通過1178例臨床研究，本品與通過美國食品藥物管理局（FDA）認(rèn)證的同類進(jìn)口試劑比較，靈敏度為97.6%，特異度為89.0%。
2. 精密性
    批內(nèi)變異系數(shù)CV%不高于15%（n＝10）。
3. 交叉反應(yīng)
未發(fā)現(xiàn)本品與類風(fēng)濕因子及以下病原體的IgM抗體陽性血清發(fā)生交叉反應(yīng)：弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹Ⅰ型病毒、單純皰疹Ⅱ型病毒。
4. 干擾試驗(yàn)
4.1 與樣品接觸的抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽）對本品檢測結(jié)果無顯著干擾。
4.2 纖維蛋白原對本品檢測結(jié)果無顯著干擾，因此本品可檢測人血清或血漿樣品。
【注意事項(xiàng)】
1. 本品僅用于體外診斷，一次性使用。
2. 用于制備本試劑盒陰性對照、陽性對照的血清或血漿已經(jīng)乙肝表面抗原（HbsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）抗體、梅毒螺旋體抗體和人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體檢測為陰性，試劑盒內(nèi)其它各種組分均無生物傳染性。由于不能保證檢測各組分所有的傳染性因素，因此本試劑盒應(yīng)作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行操作。
3. 任何臨床樣品都應(yīng)作為具有傳染性樣品對待。
4. 待檢樣品及其他潛在感染材料試驗(yàn)后應(yīng)予以消毒。
5. 注意避免皮膚或黏膜直接接觸試劑或樣品。顯色液中含TMB，終止液含硫酸。含TMB的試劑在試驗(yàn)中會(huì)誘發(fā)其它反應(yīng)；含硫酸的試劑有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應(yīng)立即用水徹底清洗。
【標(biāo)識(shí)的解釋】
包裝標(biāo)簽
的標(biāo)識(shí)    
標(biāo)識(shí)的含義 溫度限制 體外診斷醫(yī)療器械 參考使用說明 不得二次使用
【參考文獻(xiàn)】
[1] 吳霆,王少量,凌羅亞,等.控制麻疹的策略.中國計(jì)劃免疫, 1998, 4:56～59.
[2] 許文波,張禮壁,夏亭海,等.麻疹野病毒的分離及血清學(xué)的初步分析.中國計(jì)劃免疫, 1996, 2(2):4～7.
[3] Martin DB,Weiner LB, Nieburg PI, et al. Atypical Measles in Adolescents and Young Adults. Ann Intern Med, 90:877～881.
【基本信息】
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生產(chǎn)許可證編號(hào)：粵食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20040941號(hào)
【醫(yī)療器械注冊證書編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)】國械注準(zhǔn)20163402560
【說明書核準(zhǔn)及修改日期】2016年12月29日